(फ्लो साइटोमेट्री, एफसीएम) एक सेल विश्लेषक है जो दाग वाले सेल मार्करों की प्रतिदीप्ति तीव्रता को मापता है। यह एकल कोशिकाओं के विश्लेषण और छँटाई के आधार पर विकसित एक उच्च तकनीक तकनीक है। यह कोशिकाओं के आकार, आंतरिक संरचना, डीएनए, आरएनए, प्रोटीन, एंटीजन और अन्य भौतिक या रासायनिक गुणों को तुरंत माप और वर्गीकृत कर सकता है, और इन वर्गीकरणों के संग्रह पर आधारित हो सकता है।
फ्लो साइटोमीटर में मुख्य रूप से निम्नलिखित पांच भाग होते हैं:
1 प्रवाह कक्ष और द्रव विज्ञान प्रणाली
2 लेजर प्रकाश स्रोत और बीम आकार देने की प्रणाली
3 ऑप्टिकल सिस्टम
4 इलेक्ट्रॉनिक्स, भंडारण, प्रदर्शन और विश्लेषण प्रणाली
5 सेल छँटाई प्रणाली
उनमें से, लेजर प्रकाश स्रोत और बीम निर्माण प्रणाली में लेजर उत्तेजना प्रवाह साइटोमेट्री में प्रतिदीप्ति संकेतों का मुख्य माप है। उत्तेजना प्रकाश की तीव्रता और एक्सपोज़र का समय प्रतिदीप्ति संकेत की तीव्रता से संबंधित है। लेजर एक सुसंगत प्रकाश स्रोत है जो एकल-तरंग दैर्ध्य, उच्च-तीव्रता और उच्च-स्थिरता रोशनी प्रदान कर सकता है। इन आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए यह आदर्श उत्तेजना प्रकाश स्रोत है।
लेज़र स्रोत और प्रवाह कक्ष के बीच दो बेलनाकार लेंस होते हैं। ये लेंस लेज़र स्रोत से उत्सर्जित गोलाकार क्रॉस-सेक्शन वाले लेज़र बीम को छोटे क्रॉस-सेक्शन (22 μm × 66 μm) वाले अण्डाकार बीम में केंद्रित करते हैं। इस अण्डाकार किरण के भीतर लेजर ऊर्जा को सामान्य वितरण के अनुसार वितरित किया जाता है, जिससे लेजर पहचान क्षेत्र से गुजरने वाली कोशिकाओं के लिए लगातार रोशनी की तीव्रता सुनिश्चित होती है। दूसरी ओर, ऑप्टिकल सिस्टम में लेंस, पिनहोल और फिल्टर के कई सेट होते हैं, जिन्हें मोटे तौर पर दो समूहों में विभाजित किया जा सकता है: प्रवाह कक्ष के अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम।
प्रवाह कक्ष के सामने ऑप्टिकल प्रणाली में एक लेंस और पिनहोल होता है। लेंस और पिनहोल (आमतौर पर दो लेंस और एक पिनहोल) का मुख्य कार्य लेजर स्रोत द्वारा उत्सर्जित गोलाकार क्रॉस-सेक्शन वाले लेजर बीम को एक छोटे क्रॉस-सेक्शन वाले अण्डाकार बीम में केंद्रित करना है। यह लेज़र ऊर्जा को सामान्य वितरण के अनुसार वितरित करता है, लेज़र पहचान क्षेत्र में कोशिकाओं के लिए लगातार रोशनी की तीव्रता सुनिश्चित करता है और आवारा प्रकाश से हस्तक्षेप को कम करता है।
फ़िल्टर के तीन मुख्य प्रकार हैं:
1: लॉन्ग पास फिल्टर (एलपीएफ) - केवल एक विशिष्ट मान से अधिक तरंग दैर्ध्य वाले प्रकाश को गुजरने की अनुमति देता है।
2: शॉर्ट-पास फ़िल्टर (एसपीएफ़) - केवल एक विशिष्ट मान से कम तरंग दैर्ध्य वाले प्रकाश को गुजरने की अनुमति देता है।
3: बैंडपास फिल्टर (बीपीएफ) - केवल एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य रेंज में प्रकाश को गुजरने की अनुमति देता है।
फिल्टर के विभिन्न संयोजन अलग-अलग तरंग दैर्ध्य पर प्रतिदीप्ति संकेतों को व्यक्तिगत फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब (पीएमटी) तक निर्देशित कर सकते हैं। उदाहरण के लिए, पीएमटी के सामने हरे प्रतिदीप्ति (एफआईटीसी) का पता लगाने के लिए फिल्टर एलपीएफ550 और बीपीएफ525 हैं। पीएमटी के सामने नारंगी-लाल प्रतिदीप्ति (पीई) का पता लगाने के लिए उपयोग किए जाने वाले फिल्टर एलपीएफ600 और बीपीएफ575 हैं। पीएमटी के सामने लाल प्रतिदीप्ति (CY5) का पता लगाने के लिए फिल्टर LPF650 और BPF675 हैं।
फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग मुख्य रूप से सेल सॉर्टिंग के लिए किया जाता है। कंप्यूटर प्रौद्योगिकी की प्रगति, इम्यूनोलॉजी के विकास और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी तकनीक के आविष्कार के साथ, जीव विज्ञान, चिकित्सा, फार्मेसी और अन्य क्षेत्रों में इसके अनुप्रयोग तेजी से व्यापक होते जा रहे हैं। इन अनुप्रयोगों में सेल डायनेमिक्स विश्लेषण, सेल एपोप्टोसिस, सेल टाइपिंग, ट्यूमर निदान, दवा प्रभावकारिता विश्लेषण आदि शामिल हैं।
पोस्ट करने का समय: सितम्बर-21-2023
