(फ्लो साइटोमेट्री, एफसीएम) एक सेल विश्लेषक है जो दाग वाले सेल मार्करों की प्रतिदीप्ति तीव्रता को मापता है। यह एकल कोशिकाओं के विश्लेषण और छंटाई के आधार पर विकसित एक उच्च तकनीक वाली तकनीक है। यह जल्दी से आकार, आंतरिक संरचना, डीएनए, आरएनए, प्रोटीन, एंटीजन और कोशिकाओं के अन्य भौतिक या रासायनिक गुणों को माप और वर्गीकृत कर सकता है, और इन वर्गीकरणों के संग्रह पर आधारित हो सकता है।
फ्लो साइटोमीटर में मुख्य रूप से निम्नलिखित पांच भाग होते हैं:
1 प्रवाह कक्ष और द्रव प्रणाली
2 लेजर लाइट सोर्स और बीम शेपिंग सिस्टम
3 ऑप्टिकल सिस्टम
4 इलेक्ट्रॉनिक्स, भंडारण, प्रदर्शन और विश्लेषण प्रणाली
5 सेल छँटाई प्रणाली
उनमें से, लेजर लाइट सोर्स और बीम बनाने वाली प्रणाली में लेजर उत्तेजना प्रवाह साइटोमेट्री में प्रतिदीप्ति संकेतों का मुख्य माप है। उत्तेजना प्रकाश की तीव्रता और एक्सपोज़र समय प्रतिदीप्ति संकेत की तीव्रता से संबंधित हैं। लेजर एक सुसंगत प्रकाश स्रोत है जो एकल-तरंग दैर्ध्य, उच्च-तीव्रता और उच्च-स्थिरता रोशनी प्रदान कर सकता है। इन आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए यह आदर्श उत्तेजना प्रकाश स्रोत है।
लेजर स्रोत और प्रवाह कक्ष के बीच दो बेलनाकार लेंस हैं। ये लेंस लेजर बीम को लेजर क्रॉस-सेक्शन के साथ लेजर स्रोत से उत्सर्जित एक अण्डाकार बीम में एक छोटे क्रॉस-सेक्शन (22 माइक्रोन × 66 माइक्रोन) के साथ एक अण्डाकार बीम में केंद्रित करते हैं। इस अण्डाकार बीम के भीतर लेजर ऊर्जा को एक सामान्य वितरण के अनुसार वितरित किया जाता है, जिससे लेजर डिटेक्शन क्षेत्र से गुजरने वाली कोशिकाओं के लिए लगातार रोशनी की तीव्रता सुनिश्चित होती है। दूसरी ओर, ऑप्टिकल सिस्टम में लेंस, पिनहोल और फिल्टर के कई सेट होते हैं, जिन्हें मोटे तौर पर दो समूहों में विभाजित किया जा सकता है: फ्लो चैंबर के अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम।
फ्लो चैंबर के सामने ऑप्टिकल सिस्टम में एक लेंस और पिनहोल होते हैं। लेंस और पिनहोल (आमतौर पर दो लेंस और एक पिनहोल) का मुख्य कार्य लेजर बीम को एक छोटे क्रॉस-सेक्शन के साथ एक अण्डाकार बीम में लेजर स्रोत द्वारा उत्सर्जित एक गोलाकार क्रॉस-सेक्शन के साथ ध्यान केंद्रित करना है। यह एक सामान्य वितरण के अनुसार लेजर ऊर्जा वितरित करता है, लेजर डिटेक्शन क्षेत्र में कोशिकाओं के लिए लगातार रोशनी की तीव्रता सुनिश्चित करता है और आवारा प्रकाश से हस्तक्षेप को कम करता है।
फिल्टर के तीन मुख्य प्रकार हैं:
1: लॉन्ग पास फ़िल्टर (एलपीएफ) - केवल एक विशिष्ट मूल्य से अधिक तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश की अनुमति देता है।
2: शॉर्ट -पास फ़िल्टर (एसपीएफ) - केवल एक विशिष्ट मूल्य के नीचे तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश की अनुमति देता है।
3: बैंडपास फ़िल्टर (BPF) - केवल एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य रेंज में प्रकाश की अनुमति देता है।
फ़िल्टर के विभिन्न संयोजन अलग -अलग तरंग दैर्ध्य पर प्रतिदीप्ति संकेतों को अलग -अलग फोटोमुल्टिप्लियर ट्यूब (पीएमटीएस) पर निर्देशित कर सकते हैं। उदाहरण के लिए, PMT के सामने हरे रंग की प्रतिदीप्ति (FITC) का पता लगाने के लिए फ़िल्टर LPF550 और BPF525 हैं। PMT के सामने नारंगी-लाल प्रतिदीप्ति (PE) का पता लगाने के लिए उपयोग किए जाने वाले फिल्टर LPF600 और BPF575 हैं। PMT के सामने लाल प्रतिदीप्ति (CY5) का पता लगाने के लिए फिल्टर LPF650 और BPF675 हैं।
फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग मुख्य रूप से सेल छँटाई के लिए किया जाता है। कंप्यूटर प्रौद्योगिकी की उन्नति के साथ, इम्यूनोलॉजी के विकास और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी प्रौद्योगिकी के आविष्कार, जीव विज्ञान, चिकित्सा, फार्मेसी और अन्य क्षेत्रों में इसके अनुप्रयोग तेजी से व्यापक हो रहे हैं। इन अनुप्रयोगों में सेल डायनेमिक्स विश्लेषण, सेल एपोप्टोसिस, सेल टाइपिंग, ट्यूमर निदान, दवा प्रभावकारिता विश्लेषण, आदि शामिल हैं।
पोस्ट टाइम: सितंबर -21-2023
